FAQ's voor Animal/Cell Total RNA Isolation kit

De volgende analyse van de problemen die u kunt tegenkomen bij de extractie van dierlijk weefsel/cel-RNA zal u helpen bij uw experimenten.Bovendien hebben we voor andere experimentele of technische problemen, naast gebruiksaanwijzingen en probleemanalyse, speciale technische ondersteuning om u te helpen.Als u iets nodig heeft, neem dan contact met ons op via: 028-83360257 of E-mali: Tech@foregene.com.

RNA wordt niet geëxtraheerd of RNA-opbrengsten zijn laag

Er zijn vaak verschillende factoren die de efficiëntie van het herstel beïnvloeden, zoals: RNA-gehalte van weefselmonster, werkwijze, elutievolume, enz.

1. IJsbad of cryogene (4 ° C) centrifugatie werd uitgevoerd tijdens bedrijf.

Aanbeveling: Werk gedurende het hele proces bij kamertemperatuur (15-25 ° C), niet in een ijsbad en centrifugeer bij lage temperaturen.

2. Onjuiste bewaring van het monster of overmatige opslagtijd van het monster.

Aanbeveling: Bewaar monsters bij -80 °C of vries in vloeibare stikstof in en vermijd herhaald vries-dooi-gebruik;probeer vers weefsel of gekweekte cellen te gebruiken voor RNA-extractie.

3. Onvoldoende lysis van het monster.

Aanbeveling: Zorg er bij het homogeniseren van weefsel voor dat het weefsel voldoende is gehomogeniseerd en dat de weefselcellen voldoende zijn gesplitst om de afgifte van RNA te verklaren.

4. Het eluens is niet correct toegevoegd.

Aanbeveling: Bevestig dat RNase-Free ddH2O druppelsgewijs wordt toegevoegd aan het midden van het membraan van de zuiveringskolom.

5. Het juiste volume absolute ethanol is niet toegevoegd aan Buffer RL2 of Buffer RW2.

Aanbeveling: Volg de instructies, voeg het juiste volume absolute ethanol toe aan Buffer RL2 en Buffer RW2 en meng goed voordat u de kit gebruikt.

6. Dosering van weefselmonster is niet geschikt.

Aanbeveling: Gebruik 10-20 mg weefsel of (1-5) × 106 cellen per 500 μl buffer RL1, omdat overmatig gebruik van weefsel kan leiden tot verminderde RNA-extractie.

7. Onjuist elutievolume of onvolledige elutie.

Aanbeveling: Het elutievolume van de zuiveringskolom is 50-200 ul;als het elutie-effect niet bevredigend is, wordt aanbevolen om de plaatsingstijd op kamertemperatuur te verlengen na toevoeging van voorverwarmde RNase-vrije ddH2O, bijv. 5-10 minuten.

8. De zuiveringskolom heeft ethanolresidu na het wassen met buffer RW2.

Aanbeveling: Als er ethanolresidu is na het wassen van de buffer RW2, centrifugeren van de lege buis gedurende 1 minuut, kan de tijd voor de centrifugatie van de lege buis worden verhoogd tot 2 minuten, of de zuiveringskolom kan gedurende 5 minuten op kamertemperatuur worden geplaatst om het residu adequaat te verwijderen ethanol.

Gezuiverd RNA wordt afgebroken

De kwaliteit van het gezuiverde RNA is gerelateerd aan factoren zoals de bewaring van het monster, RNase-contaminatie en manipulatie, enz.

1. Weefselmonsters worden niet op tijd bewaard.

Aanbeveling: Als weefselmonsters of cellen niet tijdig na afname worden gebruikt, onmiddellijk cryopreserveren bij -80 °C of vloeibare stikstof.Gebruik waar mogelijk een nieuw afgenomen weefsel- of celmonster om RNA te extraheren.

2. Herhaald invriezen-ontdooien van weefselmonsters.

Aanbeveling: Bij het bewaren van weefselmonsters is het het beste om ze in kleine stukjes te snijden voor bewaring, en een van de stukjes te verwijderen wanneer ze worden gebruikt om herhaald invriezen en ontdooien van het monster en de afbraak van RNA te voorkomen.

3. RNase wordt geïntroduceerd of draagt ​​geen wegwerphandschoenen, maskers, etc. tijdens de operatie.

Aanbeveling: RNA-extractie-experimenten kunnen het beste worden uitgevoerd in aparte RNA-manipulatiekamers en de tafel wordt vóór het experiment gewist.

Draag wegwerphandschoenen en maskers tijdens het experiment om RNA-degradatie veroorzaakt door de introductie van RNase te minimaliseren.

4. Reagentia zijn tijdens gebruik verontreinigd met RNase.

Aanbeveling: Vervang door een nieuwe Animal Total RNA Isolation Kit voor gerelateerde experimenten.

5. De centrifugebuisjes, tips, enz. die bij RNA-manipulatie worden gebruikt, zijn verontreinigd met RNase.

Aanbeveling: Controleer of de centrifugebuisjes, tips, pipetten, enz. die bij RNA-extractie worden gebruikt, allemaal RNase-vrij zijn.

Gezuiverd verkregen RNA beïnvloedt downstream-experimenten

RNA gezuiverd door de zuiveringskolom, als de zoutionen, het eiwitgehalte te groot is, zal het stroomafwaartse experiment beïnvloeden, zoals: reverse transcriptie, Northern Blot et al.

1. Het geëlueerde RNA heeft zout-ionresiduen.

Aanbeveling: Bevestig dat het juiste volume ethanol is toegevoegd aan Buffer RW2 en voer 2 wassingen van de zuiveringskolom uit bij de centrifugale snelheid die is aangegeven voor gebruik;als er resten van zoutionen zijn, laat u de zuiveringskolom gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur in buffer RW2 staan ​​en voert u centrifugatie uit om de verwijdering van zoutverontreiniging te maximaliseren.

2. Ethanolresidu in geëlueerd RNA.

Aanbeveling: Bevestig dat na het wassen met buffer RW2 de centrifugeerbewerking van de lege buis wordt uitgevoerd met de centrifugeersnelheid die is aangegeven voor gebruik, de tijd van de centrifugeerbewerking met lege buis verhoogt tot 2 min als er nog ethanolresidu is, of deze 5 minuten op kamertemperatuur laat min na het centrifugeren van de lege buis om de verwijdering van ethanolresidu te maximaliseren.