HOE TE OM DE EFFICIENCY VAN DE OMGEKEERDE TRANSCRIPTIE VAN LNCRNA TE VERBETEREN?

Lood

Lang niet-codeert RNA, lncRNA is niet-codeert RNA met een lengte groter dan 200 nucleotiden, over het algemeen tussen nt 200-100000. lncRNA regelt genuitdrukking bij epigenetisch, transcriptie en post-transcriptional niveaus, en neemt aan X-chromosoom het tot zwijgen brengen, genoom het stempelen en chromatin wijziging, transcriptieactivering, transcriptieinterferentie, kernvervoer, de regelgeving van de celcyclus, de regelgeving van de celdifferentiatie deel, en de gevolgen van de dosiscompensatie (het effect van de Doseringscompensatie) en veel andere belangrijke regelgeving processen zijn nauw verwant aan het voorkomen, de ontwikkeling en de preventie van menselijke ziekten, en zijn momenteel één van de hotspots op het gebied van biogeneeskunde.

01 Soorten en kenmerken van LncRNA

lncRNA is hierboven verdeeld in vele types volgens de verschillende bronnen van zijn vorming, zoals aangetoond in het cijfer. Heeft de volgende kenmerken:

1. lncRNAs zijn gewoonlijk langer, met dynamische uitdrukking en verschillende het verbinden methodes tijdens differentiatie
2. Vergeleken met codage heeft de genen, lncRNA gewoonlijk een lager uitdrukkingsniveau
3. De meesten lncRNAs hebben duidelijke tijdelijke en ruimteuitdrukkingsspecificiteit tijdens weefseldifferentiatie en ontwikkeling
4. Er zijn kenmerkende uitdrukkingen in tumors en andere ziekten
5. De subcellular plaatsen van lncRNA zijn divers
6. De opeenvolging is laag in behoud, maar de functie heeft een bepaalde graad van behoud, enz.

02 Veelgestelde vragen over de Omgekeerde Transcriptie van LncRNA

wegens de lage inhoud van lncRNA in cellen, lange lengte en structuur op hoog niveau, heeft dergelijk RNA vaak complexe structuren zoals stamlijnen of haarspelden, en Rechts -rechts-qPCR is naar voren gebogen aan problemen van niet succesvolle omgekeerde transcriptie of lage efficiency.

03 LncRNA omgekeerde transcriptieoplossing

In de centrale regel, wordt het proces van RNAvirussen die hun eigen omgekeerde transcriptase gebruiken om DNA samen te stellen die RNA gebruiken als malplaatje genoemd omgekeerde transcriptie. Het proces om omgekeerde transcriptase van het RNAvirus te gebruiken om wordt cDNA malplaatje samen te stellen in vitro genoemd omgekeerde transcriptie. De belangrijkste elementen inbegrepen in het omgekeerde transcriptiesysteem: RNAmalplaatje, omgekeerde transcriptase, inleidingen en andere componenten.

1.RNA malplaatje

De invloed van RNAmalplaatje bij wordt de omgekeerde transcriptie weerspiegeld in zijn structuur, zuiverheid en integriteit. Hoger de zuiverheid en de integriteit van gehaald RNA, hoger de efficiency van omgekeerde transcriptie en nauwkeuriger de verdere kwantitatieve resultaten. RNA door de algemeen gebruikte reagentia van de RNAextractie wordt gezuiverd bevat vaak residu's van alcohol en guanidine zouten, die een sterk remmend effect op het meeste omgekeerde transcriptase die hebben.

2.Reverse-transcriptase

Omgekeerde transcriptase heeft een zeer belangrijke invloed in het volledige omgekeerde transcriptiesysteem. De geschikte temperatuur voor omgekeerde die transcriptase gebruikt=wordt= in de meeste laboratoria is over het algemeen 42°C. In feite, vereist het openen van de RNAstructuur op hoog niveau een hogere temperatuur, en de eisen ten aanzien van omgekeerde transcriptase zijn hoger.

3.Primer

De omgekeerde transcriptieinleidingen omvatten gen-specifieke inleidingen, willekeurige inleidingen en Oligo dT inleidingen. De meesten lncRNAs bevatten polyA geen staarten, en het is belangrijk de willekeurige inleidingen met Oligo dT behoorlijk om aan te passen.

4.Other componenten

Gezien het feit dat RNA bijzonder gemakkelijk is te degraderen, kan de introductie van componenten in het omgekeerde transcriptiesysteem worden geminimaliseerd, dat de ingang van RN-ase kan effectief verhinderen en de vlotte vooruitgang van omgekeerde transcriptie verzekeren.

Foregene verkrijgt uit RNAmalplaatje, omgekeerde transcriptie aan qPCR ruim escorte uw lncRNAopsporing

De dierlijke Totale Uitrusting van de RNAisolatie (met de kolom van de gDNAverwijdering)

De Isolatieuitrusting van cel Totale RNA (met de kolom van de gDNAverwijdering)

Lnc-rechts HeroTM I (met gDNase) (Super Premix voor eerste-bundel cDNA synthese van lncRNA)

PCR in real time easyTM-SYBR Groene I

Voordelen van RNAextractie:

De uitrusting gebruikt de de extractietechnologie van derde-generatierna, geen behoefte om DNase te gebruiken.

11 minuten van 96, 24, 12, en 6 plateren goed beschaafde cellen, hoog rendementextractie van gDNA-vrij, high-purity, hoogstaand totaal celrna.

De voordelen van lncRNA keren transcriptie om:

Een omgekeerd transcriptiesysteem ontwikkelde zich speciaal voor LncRNA om genomic DNA-verontreiniging snel te verwijderen.

Het omgekeerde transcriptiesysteem heeft hoge thermische stabiliteit en heeft nog goede omgekeerde transcriptieprestaties bij 50°C.

De malplaatjes met hoge GC tevreden en complexe secundaire structuur kunnen met hoog rendement worden omgekeerd.

Voordelen van qPCR:

De hete Polymerase van beginforegene Taq heeft hogere versterkingsefficiency, hogere versterkingsgevoeligheid, en hogere versterkingsspecificiteit.

De geoptimaliseerde Echte PCR Gemakkelijke Mengeling maakt SYBR Groen ik heeft hogere opsporingsgevoeligheid, en zijn fluorescentieintensiteit is 3-5 keer dat van gelijkaardige producten, die aan de behoeften van verschillende soorten fluorescentie kwantitatieve experimenten kunnen voldoen.