Rechts-QPCR EasyTM I Één Stapsybr Groene I Volledige Kwantitatieve Opsporing van Genen voor rechts en PCR In real time

Rechts-QPCR EasyTM I (Één Stap) - SYBR Groene I voltooit snel de Kwantitatieve Opsporing van Genen voor rechts en PCR In real time

Rechts -rechts-qPCR EasyTM (Één Stap) - SYBR Groene I

Cat.No.RT - 02111/02112

Éénfasige Hoofdmengeling rechts-PCR In real time

Voor onderzoek slechts gebruik

Opslag bij -20℃

Productinleiding

Rechts -rechts-qPCR EasyTM (Één Stap) - SYBR Groene Iuses een uniek systeem rechts en PCR reacties effectief om te combineren In real time, dat de kwantitatieve opsporing van genen kunnen snel voltooien. Het product heeft sterke tolerantie, hoge specificiteit en stabiliteit. Het product bevat de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq van het bedrijf unieke, die de voordelen van snellere versterking (2Kb/min), hoge versterkingsefficiency, sterke specifieke versterkingscapaciteit heeft, en laag die wanverhoudingstarief met gewone Taq-enzymen wordt vergeleken. Het wordt gebruikt hier voor rechts-PCR In real time om niet-specifieke versterking te verminderen en de nauwkeurigheid van PCR te verbeteren.

Eigenschappen

De éénfasige uitrusting maakt omgekeerde transcriptie en qPCR moeten twee reacties in dezelfde buis, slechts malplaatjerna, specifieke PCR inleidingen en RN-ase-Vrije ddH2O toevoegen.

De uitrusting kan viraal RNA kwantitatief snel en efficiënt analyseren of RNA vinden.

De uitrusting gebruikt een unieke omgekeerde die de transcriptiereagens van Foregene en de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq met een uniek reactiesysteem wordt gecombineerd de versterkingsefficiency en de specificiteit van de reactie effectief te verbeteren.

Het geoptimaliseerde reactiesysteem maakt de reactie hogere opsporingsgevoeligheid, sterkere thermische stabiliteit, en betere tolerantie hebben.

Rechts -rechts-qPCR EasyTM (Één Stap) - komt de Groene I uitrusting van SYBR met interne de verwijzingskleurstof van ROX, die kan worden gebruikt om signaalachtergrond en signaalfouten tussen putten te elimineren, die voor klanten om in verschillende modellen van kwantitatieve PCR instrumenten geschikt zijn te gebruiken.

Kit Contents

Vervoer en opslagvoorwaarden

1.Transportation voorwaarden

Het gehele proces van vervoer het bij lage temperatuur van de ijsdoos, om ervoor te zorgen dat de uitrusting in een staat van is <4>

2. Opslagvoorwaarden

• De uitrusting wordt opgeslagen bij -20℃. Sla het product in een constante temperatuurijskast bij -20℃ onmiddellijk na ontvangstbewijs op. Als de opslagvoorwaarden aangewezen zijn, zal het product geen prestaties tijdens de geldigheidsperiode van één jaar degraderen.
• de component van 2×RT-qPCR EasyTM mengeling-SYBR bevat SYBR Groene I, te houden gelieve het licht weg.

De informatie van de uitrustingscomponent

2× Rechts -rechts-qPCR EasyTM mengeling-SYBR: Foregene Omgekeerde Transcriptase, RN-aseinhibitor, de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq, optimaliseerde verhouding van dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, stabilisatoren, versterkers, en optimizers.

ROX-Verwijzingskleurstof: het wordt over het algemeen gebruikt op PCR versterkers In real time van bedrijven zoals ABI en Stratagene die het verschil tussen PCR buizen en buizen aan te passen door PCR de fouten van de steekproeflading worden veroorzaakt. De concentratie van ROX-Verwijzingskleurstof door verschillende instrumenten wordt vereist is verschillend, en de gebruiker kan het volgens de geadviseerde concentratie van het instrument toevoegen dat.

Voorzorgsmaatregelen: (De voorzorgsmaatregelen zorgvuldig gelieve te gelezen alvorens de uitrusting te gebruiken)

De reagentia zouden het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden, anders zullen de prestaties van de reagentia verminderen of zullen ongeldig worden.

De reagentia in de uitrusting zouden moeten tegen licht worden beschermd en bij -20°C. worden opgeslagen.

Het wordt geadviseerd om verse die steekproefextractie of malplaatjerna te gebruiken bij -80°C wordt opgeslagen (RNA zou het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden).

om RN-aseverontreiniging te vermijden, te voeren gelieve het experiment in de RN-ase-Vrije ruimte uit; de gebruikte pipetuiteinden en PCR de buizen moeten RN-ase-Vrij zijn; en slijtage beschikbare handschoenen en maskers.

Deze uitrusting moet met specifieke inleidingen voor experimenten worden gebruikt. Gelieve te selecteren de specifieke inleidingen voor het gen dat volgens de behoeften van het experiment moet worden vergroot.

V3o3or gebruik, zet 2×RT-qPCR EasyTM mengeling-SYBR I op ijs om me volledig te smelten flick en v3o3or gebruik mengen goed; de voorbereiding van het systeem zou op een ijsbad moeten worden in werking gesteld om de prestaties van de uitrusting te verbeteren en PCR versterking te verhogen de specificiteit.

2×RT-qPCR EasyTM mengeling-SYBR bevat SYBR Groene I, te vermijden gelieve sterk licht.

De concentratie van malplaatjerna

Rechts -rechts-qPCR EasyTM (Één Stap) - SYBR Groene I: (totaal RNA van 0.1pg-100ng)/20μl-systeem.

Verrichtingsgids

A: Voorbereiding van materialen en reagentia

1. Bereid het voorbereide RNAmalplaatje (het wordt geadviseerd om van de RNAisolatie van Foregene te gebruiken de Totale uitrustingen van de de Uitrustingsreeks om RNA te halen en te zuiveren), specifieke inleidingen (10μM) en verwante verbruiksgoederen en instrumenten voor.

Nota: Verzeker gelieve de integriteit van RNA en te proberen die RNA te gebruiken uit verse steekproeven wordt gehaald.

2. Gezette 2×RT-qPCR EasyTM mengeling-SYBR, RN-ase-Vrije de Verwijzingskleurstof van ddH2O, en 50×ROX-(indien nodig) op ijs om het te laten natuurlijk, en flick de buismuur smelten zich tot gebruik te mengen.

B: Rechts -rechts-qPCR systeemvoorbereiding

2× Rechts -rechts-qPCR EasyTM mengeling-SYBR is geschikt en snel te gebruiken, en vermijdt verontreiniging tijdens verrichting en experimentele die fouten door veelvoudige voorbereidingen van het reactiesysteem zoveel mogelijk wordt veroorzaakt. Wanneer het gebruiken, slechts voegt de helft van het volume van het reactiesysteem (bijvoorbeeld, als het reactiesysteem 20μl is, neem de oplossing van 10μl 2×RT-qPCR EasyTM mengeling-SYBR), RNAmalplaatje en specifieke inleidingen toe, en voegt RN-ase-Vrije ddH2O toe om het volume omhoog te maken. Verwijs naar Lijst 1 hieronder voor de specifieke Rechts -rechts-qPCR voorbereiding van het reactiesysteem

Vorm 1: Rechts -rechts-qPCR systeemvoorbereiding

1*: Gewoonlijk is de definitieve concentratie van inleiding 0.20.25μM om betere resultaten te krijgen. Wanneer de reactieprestaties slecht zijn, kan de inleidingsconcentratie binnen de waaier van 0.10.5μM worden aangepast.

Nota: De voorwaartse Inleiding en de Omgekeerde Inleiding zijn specifieke inleidingen voor het doelgen.

2*: Kies de aangewezen definitieve concentratie van ROX-Verwijzingskleurstof volgens verschillende kwantitatieve PCR instrumenten. De optimale concentratie van ROX-Verwijzingskleurstof voor wordt gemeenschappelijke kwantitatieve PCR machines getoond in de volgende lijst:

C: Rechts -rechts-qPCR reactiesysteem het plaatsen

• Na zacht het voorbereiden van het systeem Rechts -rechts-qPCR met betrekking tot de bovengenoemde lijst, mengeling (u kunt een zacht pipette pipetuiteinde gebruiken; u kunt zich ook op een vortexer mengen en kort centrifugeren om de vloeistof te verzamelen op de buismuur of de buis GLB wordt verspreid, en op ijsdoos te plaatsen die voor later gebruik).

2. Verwijs naar de Rechts -rechts-qPCR montages van het reactieprogramma (Lijst 2) om de temperatuur en de tijd van de reactie te plaatsen.

Nota: om de activiteit van 2×RT-qPCR EasyTM mengeling-SYBR te verzekeren en zijn versterkingsefficiency te verbeteren, is het best om het Rechts -rechts-qPCR reactiesysteem na vestiging voor te bereiden het PCR instrumentenprogramma, zodat het reactieprogramma kan onmiddellijk zijn ingegaan nadat de systeemvoorbereiding wordt voltooid.

3. om het beste qPCReffect te krijgen, gradiënt kan PCR worden gebruikt om de reactievoorwaarden voor verschillende malplaatjes en verschillende inleidingen te optimaliseren.

Nota: De waaier van de uitbreidingstemperatuur van de Polymerase van DNA van Foregene Hotstar Taq in deze uitrusting wordt verstrekt die is: 60-72℃, en de beste uitbreidingstemperatuur is 72℃.

Het volgende is een voorbeeld van Rechts -rechts-qPCR reactievoorwaarden. Het wordt geadviseerd om een methode in twee stappen voor PCR reactie te gebruiken. Wanneer de malplaatjeconcentratie te laag is om niet-specifieke versterking te veroorzaken, leidt de lage inleidingstm waarde tot lage versterkingsefficiency of de slechte herhaalbaarheid van de versterkingskromme, enz., wordt het geadviseerd om de methode in drie stappen voor PCR reactie te proberen. Verwijs naar Lijst 2-1 (methode in twee stappen) en dien 2-2 (methode in drie stappen) voor het plaatsen van Rechts -rechts-qPCR reactievoorwaarden in.

Vorm 2-1: Rechts -rechts-qPCR reactieprogramma plaatsen (in twee stappen)

Vorm 2-2: Rechts -rechts-qPCR reactieprogramma plaatsen (in drie stappen)

1*: De omgekeerde transcriptietijd kan volgens experimentele behoeften worden aangepast. De algemene endogene genen zoals β-Actin vergen slechts 10 minuten; om specifieke uitgedrukte genen te ontdekken, kan de omgekeerde transcriptietijd geschikt worden uitgebreid zoals nodig.

2*: Plaats een specifieke tijd volgens de lengte van het vergrote doelfragment. De versterkingssnelheid van de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq is 2kb/min.

Nota: PCR de reactievoorwaarden variëren afhankelijk van de structurele voorwaarden van het malplaatje, de inleidingen, enz. Voor RNAmalplaatjes met complexe secundaire structuren, wordt het geadviseerd om 42℃ voor de eerste stap van omgekeerde transcriptie te gebruiken. In de specifieke verrichting, is het noodzakelijk om de optimale reactievoorwaarden volgens de specifieke voorwaarden zoals de grootte van het doelfragment te ontwerpen, de basisopeenvolging van het vergrote fragment en de GC inhoud en de lengte van de inleiding, met inbegrip van onthardende temperatuur, uitbreidingstijd, enz.

Verrichtingsdiagram