Rechts-PCR EasyTM II Cat.No.RT In twee stappen - 02021/02022 rechts-PCR Hoofdmengelingspcr Uitrustingen In twee stappen

Rechts-PCR EasyTM II Cat.No.RT (In twee stappen) - 02021/02022 rechts-PCR Hoofdmengelingspcr Uitrustingen In twee stappen

Rechts-PCR EasyTM II (In twee stappen)

Cat.No.RT - 02021/02022

Hoofdmengeling rechts-PCR in twee stappen

Rechts-PCR EasyTM II (In twee stappen)

Cat.No.RT - 02021/02022

Hoofdmengeling rechts-PCR in twee stappen

Voor onderzoek slechts gebruik

Opslag bij -20℃

Productinleiding

Rechts-PCR EasyTM II (In twee stappen) bevat alle reagentia voor rechts-PCR in twee stappen, die rechts-reactie en PCR reactie in dezelfde uitrusting combineert, die geoptimaliseerde rechts-Mengeling en PCR Mengeling verstrekt. De unieke rechts-Mengeling kan de eerste-bundel van uitstekende kwaliteit gemakkelijk en efficiënt samenstellen cDNA. 2× PCR EasyTM de Mengeling plus heeft hoog rendement en specifieke versterking. De organische combinatie twee maakt de opsporing van het doelgen gevoeliger.

Eigenschappen

De kwantitatieve analyse in real time van RNA kan snel en nauwkeurig worden uitgevoerd.

De uitrusting gebruikt een unieke omgekeerde die de transcriptiereagens van Foregene en de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq met een uniek reactiesysteem wordt gecombineerd de versterkingsefficiency en de specificiteit van de reactie effectief te verbeteren.

Het geoptimaliseerde reactiesysteem maakt de reactie hogere opsporingsgevoeligheid, sterkere thermische stabiliteit, en betere tolerantie hebben.

Kit Contents

Vervoer en opslagvoorwaarden

1. Vervoersvoorwaarden

Het gehele proces van vervoer het bij lage temperatuur van de ijsdoos, om ervoor te zorgen dat de uitrusting in een staat van is <4>

2. Opslagvoorwaarden

Opgeslagen bij -20°C.-Opslag het product in een constante temperatuurijskast bij -20°C onmiddellijk na ontvangstbewijs. Als de opslagvoorwaarden aangewezen zijn, zal het product geen prestaties tijdens de geldigheidsperiode van één jaar degraderen.

De informatie van de uitrustingscomponent

2× de Mengeling van rechts EasyTM: Foregene Omgekeerde Transcriptase, RN-aseinhibitor, dNTPs, reactiebuffer, optimizer en stabilisator, enz.

2× PCR EasyTM Mengeling plus: De Polymerase van DNA van Foregenetaq, dNTPs, Mg2+, reactiebuffer, optimizer en stabilisator.

Voorzorgsmaatregelen: (De voorzorgsmaatregelen zorgvuldig gelieve te gelezen alvorens de uitrusting te gebruiken)

De reagentia zouden het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden, anders zullen de prestaties van de reagentia verminderen of zullen ongeldig worden.

Voor malplaatjes, wordt het geadviseerd die RNA uit verse die steekproeven wordt gehaald of te gebruiken bij -80℃ wordt opgeslagen (RNA zou het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden).

om RN-aseverontreiniging te vermijden, zou de experimentverrichting in de RN-ase-Vrije ruimte moeten worden uitgevoerd; de gebruikte pipetuiteinden en PCR centrifuge de buizen moeten RN-ase-Vrij zijn; en de beschikbare handschoenen en de maskers zouden moeten worden gedragen.

Deze uitrusting moet met specifieke inleidingen voor experimenten worden gebruikt. Gelieve te selecteren de specifieke inleidingen voor het gen dat volgens de behoeften van het experiment moet worden vergroot.

V3o3or gebruik, zet de Mengeling van 2×RT EasyTM en de Mengeling van 2×PCR EasyTM plus op ijs om me volledig te smelten flick en v3o3or gebruik mengen goed; de voorbereiding van het systeem zou op een ijsbad moeten worden in werking gesteld om de prestaties van de uitrusting te verbeteren en Specificiteit van PCR versterking te verbeteren.

Voorzorgsmaatregelen: (De voorzorgsmaatregelen zorgvuldig gelieve te gelezen alvorens de uitrusting te gebruiken)

- De reagentia zouden het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden, anders zullen de prestaties van de reagentia verminderen of zullen ongeldig worden.

- Voor malplaatjes, wordt het geadviseerd die RNA uit verse die steekproeven wordt gehaald of te gebruiken bij -80℃ wordt opgeslagen (RNA zou het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden).

- om RN-aseverontreiniging te vermijden, zou de experimentverrichting in de RN-ase-Vrije ruimte moeten worden uitgevoerd; de gebruikte pipetuiteinden en PCR centrifuge de buizen moeten RN-ase-Vrij zijn; en de beschikbare handschoenen en de maskers zouden moeten worden gedragen.

- Deze uitrusting moet met specifieke inleidingen voor experimenten worden gebruikt. Gelieve te selecteren de specifieke inleidingen voor het gen dat volgens de behoeften van het experiment moet worden vergroot.

- V3o3or gebruik, zet de Mengeling van 2×RT EasyTM en de Mengeling van 2×PCR EasyTM plus op ijs om me volledig te smelten flick en v3o3or gebruik mengen goed; de voorbereiding van het systeem zou op een ijsbad moeten worden in werking gesteld om de prestaties van de uitrusting te verbeteren en Specificiteit van PCR versterking te verbeteren.

De concentratie van malplaatjerna

Rechts-PCR EasyTM II (In twee stappen): (totaal RNA van 0.1pg-5μg)/20μl-systeem

Verrichtingsgids

A-1: Voorbereiding van materialen en reagentia

1. Bereid het voorbereide RNAmalplaatje (het wordt geadviseerd om van de RNAisolatie van Foregene te gebruiken de Totale uitrustingen van de de Uitrustingsreeks om RNA te halen en te zuiveren), specifieke inleidingen (10μM) en verwante verbruiksgoederen en instrumenten voor.

Nota: Verzeker gelieve de integriteit van RNA en te proberen die RNA te gebruiken uit verse steekproeven wordt gehaald.

2. De gezette Mengeling van 2×RT EasyTM en RN-ase-Vrije ddH2O op een ijsbad om het te laten natuurlijk, en flick de buismuur smelten zich voor later gebruik goed te mengen.

A-2: Rechts-systeemvoorbereiding

2× de Mengeling van rechts EasyTM is geschikt en snel te gebruiken, vermijdend verontreiniging tijdens verrichting en experimentele die fouten door veelvoudige voorbereidingen van het reactiesysteem zoveel mogelijk wordt veroorzaakt. Wanneer het gebruiken, neem enkel de helft van het volume van het reactiesysteem (bijvoorbeeld, als het reactiesysteem 20μl is, neem de Mengelingsoplossing van 10μl 2×RT EasyTM), voeg RNAmalplaatje en omgekeerde transcriptieinleidingen toe, en voeg RN-ase-Vrije ddH2O toe om het volume aan 20μl omhoog te maken. De specifieke rechts-voorbereiding van het reactiesysteem kan naar Lijst 1 hieronder verwijzen.

Vorm 1: Rechts-systeemvoorbereiding

A-3: Rechts-reactieprogramma het plaatsen

1. Na zacht het voorbereiden van het rechts-systeem met betrekking tot de bovengenoemde lijst, mengeling (u kunt een pipetuiteinde gebruiken om zacht te blazen; u kunt het ook mengen op vortexer en het centrifugeren om de vloeistof te verzamelen op de buismuur of de buis GLB wordt verspreid, en het te plaatsen die in Klaar om op ijsdoos) te gebruiken.

2. Verwijs naar de rechts-montages van het reactieprogramma (Lijst 2) om de reactietemperatuur, de tijd, enz. te plaatsen.

Nota: om de activiteit van Mengeling te verzekeren en zijn versterkingsefficiency te verbeteren, is het best om het rechts-reactiesysteem voor te bereiden nadat het metaalbad de vastgestelde reactietemperatuur bereikt (omgekeerde transcriptietemperatuur 42℃ of 50℃), zodat het systeem onmiddellijk na de voltooiing van de systeemvoorbereiding kan worden voorbereid. Ga het reactieprogramma in. De rechts-reactie kan ook op een PCR machine worden uitgevoerd.

Vorm 2: Rechts-reactieprogramma het plaatsen

Nota: Wanneer het gebruiken van Willekeurige inleiding, zou de reactie bij 25℃ voor 10min vóór de eerste stap van de reactie moeten worden voorverwarmd. De bovengenoemde procedure is voor slechts verwijzing. De daadwerkelijke reactievoorwaarden variëren afhankelijk van de structurele voorwaarden van het malplaatje, de inleidingen, enz. Voor RNAmalplaatjes met complexe secundaire resultaten, moet de eerste reactietemperatuur 50℃ zijn.

1. Het reactieproduct kan direct in verdere tests worden gebruikt, of bij -20°C worden opgeslagen voor tot een week. Voor opslag op lange termijn, wordt het geadviseerd om het herhaalde bevriezen en het ontdooien bij -80°C. te vermijden.

B: PCR identificatiereactie

B-1: PCR de voorbereiding van het reactiesysteem

Gebruik cDNA in stap A als malplaatje wordt samengesteld, en voer de PCR reactie met de Mengeling van 2×PCR EasyTM plus verstrekt in de uitrusting die uit. Plaats de Mengeling van 2×PCR EasyTM plus, cDNA, en RN-ase-Vrije ddH2O op een ijsbad om het te laten natuurlijk, en flick de buismuur smelten zich tot gebruik te mengen. Voor de specifieke PCR systeemvoorbereiding, verwijs hieronder naar Lijst 3.

Vorm 3: PCR de voorbereiding van het reactiesysteem 反应体系配制

1*: Gewoonlijk is de definitieve concentratie van inleiding 0.20.25μM om betere resultaten te krijgen. Wanneer de reactieprestaties slecht zijn, kan de inleidingsconcentratie binnen de waaier van 0.10.5μM worden aangepast.

B-2: PCR reactievoorwaarde het plaatsen

1. Na zacht het voorbereiden van het PCR systeem met betrekking tot de bovengenoemde lijst, mengeling (u kunt een pipetuiteinde gebruiken om zacht te blazen; u kunt het ook mengen op vortexer en het centrifugeren om de vloeistof te verzamelen op de buismuur of de buis GLB wordt verspreid, en het te plaatsen die in Klaar om op ijsdoos) te gebruiken.

2. Verwijs naar de PCR montages van het reactieprogramma (Lijst 4) om de temperatuur en de tijd van de reactie te plaatsen.

Nota: om de activiteit van de PCR Mengeling te verzekeren en zijn versterkingsefficiency te verbeteren, is het best om de PCR voorwaarden op de PCR machine te plaatsen alvorens het PCR systeem voor te bereiden.

Vorm 4: PCR reactievoorwaarde het plaatsen

1*: Plaats een specifieke tijd volgens de lengte van het vergrote doelfragment. De versterkingssnelheid van de Polymerase van DNA van Foregene Taq is 2kb/min.

Nota: PCR de reactievoorwaarden variëren afhankelijk van de structurele voorwaarden van het malplaatje, de inleidingen, enz. Voor RNAmalplaatjes met complexe secundaire structuren, adviseert men dat de reactietemperatuur voor de eerste stap van omgekeerde transcriptie 50°C. is. In specifieke verrichtingen, is het noodzakelijk om de optimale reactievoorwaarden, met inbegrip van onthardende temperatuur, uitbreidingstijd, enz., volgens specifieke voorwaarden zoals de grootte van het doelfragment te ontwerpen, de basisopeenvolging van het vergrote fragment, en de GC inhoud en de lengte van de inleiding.

Rechts-PCR Verrichtingsdiagram