Rechts-QPCR EasyTM (Één Stap) - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132 Éénfasige Hoofdmengeling rechts-PCR In real time

Cat.No.RT - 02131/02132

Éénfasige Hoofdmengeling rechts-PCR In real time

Rechts-PCR EasyTM I (Één Stap)

Cat.No.RT - 02011/02012

Éénfasige Hoofdmengeling rechts-PCR

Voor onderzoek slechts gebruik

Opslag bij -20℃

Productinleiding

De reeksproducten van Foregene realiseren de Éénfasige rechts-PCR EasyTM de geïntegreerde reactie van RNA op double-stranded DNA, d.w.z., omgekeerde transcriptie en PCR de versterking wordt voltooid in dezelfde buis van de reactiecentrifuge en hetzelfde reactiesysteem, dat de experimentele stappen vereenvoudigt, optimaliseert het experimentele programma, en verbetert de experimentefficiency.

Rechts -rechts-qPCR EasyTM (Één Stap) - Taqman die de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq gebruiken, het geoptimaliseerde systeem van Taqman qPCR kan kwantitatieve opsporing Rechts -rechts-qPCR In real time van de malplaatjes van spoorrna snel en specifiek uitvoeren.

Eigenschappen

- De éénfasige uitrusting laat dat omgekeerde transcriptie en PCR toe worden uitgevoerd in dezelfde buis, slechts malplaatjerna, specifieke PCR inleidingen en RN-ase-Vrije ddH2O moeten toevoegen.

- De kwantitatieve analyse in real time van viraal RNA of spoorrna kan snel en nauwkeurig worden uitgevoerd.

- De uitrusting gebruikt een unieke omgekeerde die de transcriptiereagens van Foregene en de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq met een uniek reactiesysteem wordt gecombineerd de versterkingsefficiency en de specificiteit van de reactie effectief te verbeteren.

- Het geoptimaliseerde reactiesysteem maakt de reactie hogere opsporingsgevoeligheid, sterkere thermische stabiliteit, en betere tolerantie hebben.

- Rechts -rechts-qPCR EasyTM (Één Stap) - Taqman-uitrusting komt met interne de verwijzingskleurstof van ROX, die kan worden gebruikt om signaalachtergrond en signaalfouten tussen putten te elimineren, die voor eind geschikt zijn - gebruikers om in verschillende modellen van kwantitatieve PCR instrumenten te gebruiken

De controle van productkwaliteit

Volgens Totaal de Kwaliteitsbeheersysteem van FOREGEN (Totaal de Kwaliteitsbeheersysteem van FOREGENE), is elke partij van rechts-PCR EasyTM I (Één Stap) uitrustingen strikt geteste veelvoudige tijden om de kwaliteit, de betrouwbaarheid en de stabiliteit van elke uitrustingenpartij te verzekeren.

Kit Contents

Vervoer en opslagvoorwaarden

1.Transportation voorwaarden

Het gehele proces van vervoer het bij lage temperatuur van de ijsdoos, om ervoor te zorgen dat de uitrusting in een staat van is <4>

2. Opslagvoorwaarden

Rechts EasyTM I wordt opgeslagen bij -20°C.-Opslag het product in een constante temperatuurijskast bij -20°C onmiddellijk na ontvangstbewijs. Als de opslagvoorwaarden aangewezen zijn, zal het product geen prestaties tijdens de geldigheidsperiode van één jaar degraderen.

De informatie van de uitrustingscomponent

2× de Mengeling van rechts-PCR EasyTM: Foregene Omgekeerde Transcriptase, RN-aseinhibitor, de Polymerase van DNA van Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, reactiebuffer, optimizer en stabilisator, enz.

Voorzorgsmaatregelen: (De voorzorgsmaatregelen zorgvuldig gelieve te gelezen alvorens de uitrusting te gebruiken)

Voor malplaatjes, wordt het geadviseerd die RNA uit verse die steekproeven wordt gehaald of te gebruiken bij -80℃ wordt opgeslagen (RNA zou het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden).

om RN-aseverontreiniging te vermijden, zou de experimentverrichting in de RN-ase-Vrije ruimte moeten worden uitgevoerd; de gebruikte pipetuiteinden en PCR centrifuge de buizen moeten RN-ase-Vrij zijn; en de beschikbare handschoenen en de maskers zouden moeten worden gedragen. V3o3or gebruik, zet de Mengeling van 2×rt-PCR EasyTM op ijs om me volledig te smelten flick en v3o3or gebruik mengen goed; de voorbereiding van het systeem zou op een ijsbad moeten worden in werking gesteld om de prestaties van de uitrusting en de specificiteit van PCR versterking te verbeteren.

De concentratie van malplaatjerna

Rechts-PCR EasyTM I (Één Stap): (totaal RNA van 0.1pg-1μg)/20μl-systeem

Kit Application

- Deze uitrusting wordt gebruikt voor Snelle opsporing van hoog-exemplaar en laag-exemplaargenen.

- Het is vooral geschikt voor snelle opsporing van RNAmalplaatjes met hoge GC tevreden of complexe secundaire structuur.

De controle van productkwaliteit

Volgens Totaal de Kwaliteitsbeheersysteem van FOREGEN (Totaal de Kwaliteitsbeheersysteem van FOREGENE), is elke partij van rechts-PCR EasyTM I (Één Stap) uitrustingen strikt geteste veelvoudige tijden om de kwaliteit, de betrouwbaarheid en de stabiliteit van elke uitrustingenpartij te verzekeren.

Verrichtingsgids

A: Voorbereiding van materialen en reagentia

1. Bereid het voorbereide RNAmalplaatje (het wordt geadviseerd om van de RNAisolatie van Foregene te gebruiken de Totale uitrustingen van de de Uitrustingsreeks om RNA te halen en te zuiveren), specifieke inleidingen (10μM) en verwante verbruiksgoederen en instrumenten voor.

Nota: Verzeker gelieve de integriteit van RNA en te proberen die RNA te gebruiken uit verse steekproeven wordt gehaald.

2. De Mengeling van plaats2× rechts-PCR EasyTM en RN-ase-Vrije ddH2O op een ijsbad om het te laten natuurlijk, en flick de buismuur smelten zich voor later gebruik goed te mengen.

B: Rechts-PCR systeemvoorbereiding

De Mengeling van 2×rt-PCR EasyTM is geschikt en snel te gebruiken, vermijdend verontreiniging tijdens verrichting en experimentele die fouten door veelvoudige voorbereidingen van het reactiesysteem zoveel mogelijk wordt veroorzaakt. Wanneer het gebruiken, slechts voegt de helft van het volume van het reactiesysteem (bijvoorbeeld, als het reactiesysteem 20μl is, neem 10μl-de Mengelingsoplossing van 2×rt-PCR EasyTM), passend bedrag RNAmalplaatje en specifieke inleidingen toe, en voegt RN-ase-Vrije ddH2O toe om het volume omhoog te maken. Verwijs naar Lijst 1 hieronder voor de specifieke rechts-PCR voorbereiding van het reactiesysteem.

Vorm 1: Rechts-PCR systeemvoorbereiding

1*: Gewoonlijk is de definitieve concentratie van inleiding 0.20.25μM om betere resultaten te krijgen. Wanneer de reactieprestaties slecht zijn, kan de inleidingsconcentratie binnen de waaier van 0.10.5μM worden aangepast.

Nota: De voorwaartse Inleiding en de Omgekeerde Inleiding zijn de specifieke inleidingen voor het doelgen; 50μl het systeem, gelieve te verwijzen naar het 20μl-systeem om de reagensdosering proportioneel aan te passen.

C: Rechts-PCR reactieprogramma het plaatsen

• Na zacht het voorbereiden van het systeem rechts-PCR met betrekking tot de bovengenoemde lijst, mengeling (u kunt pipetuiteinde gebruiken om zacht te blazen; u kunt zich ook op een vortexer mengen en kort centrifugeren om de vloeistof te verzamelen op de buismuur of de buis GLB wordt verspreid, en op ijsdoos te plaatsen die voor later gebruik).

2. Verwijs naar de rechts-PCR montages van het reactieprogramma (Lijst 2) om de temperatuur en de tijd van de reactie te plaatsen.

Nota: om de activiteit van de Mengeling van 2×rt-PCR te verzekeren EasyTM en zijn versterkingsefficiency te verbeteren, is het best om het rechts-PCR reactiesysteem voor te bereiden na het plaatsen van het PCR instrumentenprogramma, zodat het reactieprogramma kan onmiddellijk zijn ingegaan nadat het systeem wordt voorbereid.

Vorm 2: Rechts-PCR reactiesysteem het plaatsen

Nota: De bovengenoemde procedure is voor slechts verwijzing. De daadwerkelijke reactievoorwaarden variëren afhankelijk van de structurele voorwaarden van het malplaatje, de inleidingen, enz. Voor RNAmalplaatjes met complexe secundaire structuren, moet de reactietemperatuur voor de eerste stap van omgekeerde transcriptie 50°C. zijn. In de specifieke verrichting, is het noodzakelijk om de optimale reactievoorwaarden, met inbegrip van onthardende temperatuur, uitbreidingstijd, enz. volgens de specifieke voorwaarden van de grootte van het doelfragment, de basisopeenvolging van het vergrote fragment, en de GC inhoud en de lengte van de inleiding te ontwerpen.
Rechts-PCR Verrichtingsdiagram

Foregene Omgekeerde Transcriptase

Kan Foregene omgekeerde transcriptase hoogst efficiënte en specifieke omgekeerde transcriptiereactie verstrekken. Omgekeerde transcriptase stelt hoge affiniteit tentoon en handhaaft nog goede omgekeerde transcriptieactiviteit bij een reactietemperatuur van 50°C. Het kan goed omkeren transcribeert RNA met complexe secundaire structuur geen die andere omgekeerde transcriptases kunnen behandelen. Foregene Omgekeerde Transcriptase heeft hoge gevoeligheid en is toepasselijk in een brede waaier van RNAbedragen (0.1pg≤RNA≤1μg).

De Polymerase van DNA van Foregenehotstar Taq

Verstrekt een hoogst specifieke versterking van PCR. Wanneer de omgekeerde transcriptie wordt uitgevoerd is, DNA-is de polymerase volledig ondoeltreffend en belemmert niet de omgekeerde transcriptiereactie. Na het PCR reactieprogramma, aan 94°C wordt verwarmd, wordt de DNA-polymerase geactiveerd en omgekeerde transcriptase die wordt buiten werking gesteld. Het heet-beginproces elimineert de vorming van niet-specifieke onthardende inleidingen en inleidingsdimeer in de eerste cyclus, die hoge specificiteit en betrouwbaarheid van PCR versterking verzekert.

Voorzichtigheid: (Tevreden om de voorzorgsmaatregelen zorgvuldig te lezen alvorens de uitrusting te gebruiken)

- De reagentia zouden het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden, anders zullen de prestaties van de reagentia verminderen of zullen ongeldig worden.

- Het wordt geadviseerd om verse die steekproefextractie of malplaatjerna te gebruiken bij -80℃ wordt opgeslagen (RNA zou het herhaalde bevriezen en het ontdooien moeten vermijden).

- om RN-aseverontreiniging te vermijden, zou de experimenthandeling in de RN-ase-Vrije ruimte moeten worden uitgevoerd; de gebruikte pipetuiteinden en PCR de buizen moeten RN-ase-Vrij zijn; en de beschikbare handschoenen en de maskers zouden moeten worden gedragen.

- Deze uitrusting moet met specifieke inleidingen voor experimenten worden gebruikt. Gelieve te selecteren de specifieke inleidingen voor het gen dat volgens de behoeften van het experiment moet worden vergroot.

- V3o3or gebruik, zet 2× de Mengeling van rechts-PCR EasyTM op ijs om me volledig te smelten flick en v3o3or gebruik mengen goed; de voorbereiding van het systeem zou op een ijsbad moeten worden in werking gesteld om de prestaties van de uitrusting en de specificiteit van PCR versterking te verbeteren.

- Ijsbad

Zelf-voorbereide reagentia

- RNAmalplaatje

- Gen specifieke PCR inleidingen

Veiligheid

       - Dit product is slechts voor wetenschappelijk onderzoekgebruik, te gebruiken gelieve het niet in geneeskunde, klinische geneeskunde, voedsel en schoonheidsmiddelen.

       - Kleren van het slijtage de geschikte laboratorium, handschoenen, beschermende glazen, enz. wanneer het gebruiken van chemische producten.

De negatieve controle heeft te hoge fluorescentiewaarde

1. Reagensverontreiniging tijdens verrichting wordt veroorzaakt die.

Aanbeveling: Vervangen door nieuwe reagentia voor experimenten rechts-PCR.

2. De verontreiniging kwam tijdens de voorbereiding van het PCR reactiesysteem voor. Aanbeveling: Neem noodzakelijke beschermende maatregelen tijdens verrichting, zoals: dragend latexhandschoenen, die een pipetuiteinde met een filter, enz. gebruiken.

3. De inleidingen worden gedegradeerd, en de degradatie van de inleidingen zal leiden tot niet-specifieke versterking.

Suggestie: Gebruik sds-PAGINA elektroforese om te ontdekken of de inleidingen worden gedegradeerd, en vervang hen met nieuwe inleidingen voor experimenten rechts-PCR.

Slechte herhaalbaarheid van kwantitatieve waarden

1. Het instrument is defect.

Suggestie: Er kunnen fouten tussen elk PCR gat van de PCR machine zijn, resulterend in slechte reproduceerbaarheid tijdens temperatuurbeheer of opsporing.

Gelieve te voeren de test volgens de instructies van het overeenkomstige instrument uit.

2. De steekproefzuiverheid is niet goed.

Aanbeveling: De onzuivere steekproeven zullen leiden tot slechte reproduceerbaarheid van het experiment, dat de zuiverheid van het malplaatje en de inleidingen omvat. Het is best repurify het malplaatje, en de inleidingen worden het best gezuiverd door SDS-PAGE.

3. De PCR van de systeemvoorbereiding en opslag tijd is te lang.

Suggestie: Gebruik het systeem rechts-PCR voor PCR experimenten onmiddellijk na voorbereiding, en verlaat te lang het niet; het wordt aan opstelling het PCR programma alvorens met de rechts-PCR systeemvoorbereiding geadviseerd te werk te gaan.

4. De PCR versterkingsvoorwaarden zijn niet geschikt, en de de inleidingsopeenvolging of concentratie zijn ongepast.

Suggestie: bevestig de juistheid van de inleidingsopeenvolging en de inleiding is niet gedegradeerd; wanneer het versterkingssignaal niet goed is, probeer om de onthardende temperatuur aan te passen en de inleidingsconcentratie geschikt aan te passen.